在生物实验室内模拟生物体DNA复制所必需的条件是①酶类②游离四种脱氧核苷酸③ATP④DNA分子⑤mRNA⑥tRNA⑦适宜的温度⑧适宜的PH值（）

简述真核生物DNA合成与原核生物DNA合成的主要区别。

DNA重组的顺序是（）①用连接酶将外源DNA与载体连接。②培养细胞以扩增重组DNA。③通过转化将重组DNA引入受体细胞。④筛选出含有重组体的克隆。

第一个作为重组DNA载体的质粒是（）

第一个作为重组 DNA 载体的质粒是（）。

第一个作为重组 DNA载体的质粒是（）。

当①DNA在两个同向重复之间②DNA在两个反向重复之间发生重组的效应各是什么？

人造微小染色体（artificial minichromosome）通常有①自主复制DNA序列②着丝粒DNA序列③端粒DNA序列④rRNA序列（）

打算将一个 cDNA 克隆到一个表达载体，以便在 E．coli 中大量制备相应的蛋白质。这个cDNA 的两侧具有 BamHI的位点，因此计划将它从 BamHI的位点插入载体中。实验严格地按照克隆手册中的方法进行：载体用 BamHI切割以后，立即用碱性磷酸酶处理除去 5’磷酸；接着将处理过的载体同用 BamHI切割的 cDNA 片段混合，加入 DNA连接酶后进行温育，连接之后，将 DNA 同已处理过的可以接受 DNA的细菌感受态细胞混合。最后，将混合物涂布在加有抗生素固体培养基的平板上。由于载体上带有抗生素的抗性基因，所以，转化的细菌能够存活。实验中同时设置了 4 个对照： 对照1： 将未同任何载体接触过的细菌细胞涂布在培养平板上； 对照2： 将未切割载体转化过的细菌细胞涂布在培养平板上； 对照3： 将经切割（但未用碱性磷酸酶处理）并用连接酶连接（但没有cDNA片段）的载体转化过的细菌细胞涂布在培养平板上； 对照4： 将经切割（并用碱性磷酸酶处理过）并用 DNA连接酶连接（但没有cDNA片段）的载体转化过的细 菌细胞涂布在培养平板上。 在进行第一次实验时，感受态细胞不是自己制备的，结果，在所有的平板上都长出了多到无法计数的菌落（表 2）。在第二次实验中，自己制备感受态细胞，但这一次，所有的平板上都没有菌落生长（表 2）。接着又进行了第三次实验，这次得到了转化子（表 2）。从实验平板上挑出 12 个菌落，分离了质粒 DNA，并用 BamHI进行切割，其中 9个克隆产生大小同载体一样的单一的一条带，另三个克隆中切出一个cDNA 片段，实验终于获得成功。 你如何看待第一次的实验结果？对照 1 的目的是什么？

我们实验室研究生做了一个如下的实验：将pdc基因（丙酮酸脱羧酶）克隆到pUC18载体中，以便在E.coli TOP10中表达，这个pdc基因两侧具有BamHI的位点，因此计划将它从BamHI的位点插入载体中。实验严格按分子克隆实验手册中进行：载体用BamHI切割后，立即用碱性磷酸酶处理，接着将处理过的载体同用BamHI切割的pdc基因混合，加入T4连接酶进行温育，连接后，将DNA同处理过的可以接受外源DNA的E.coli TOP10感受态细胞混合。最后将混合物涂布在加有氨苄青霉素、IPTG和x-gal固体培养基的平板上。  实验中同时设置了4个对照：  对照1：将未同任何载体接触过的细菌细胞涂布在培养平板上。 对照2：将未切割载体转化过的细菌细胞涂布在培养平板上。  对照3：将经切割（但未用碱性磷酸酶处理）并用T4连接酶连接（但没有pdc基因）的载体转化过的细菌细胞涂布在培养平板上。  对照4：将经切割（并用碱性磷酸酶处理过）并用T4连接酶连接（但没有pdc基因）的载体转化过的细菌细胞涂布在培养平板上。  在进行第一次实验时，感受态细胞不是自己制备的，结果，在所有的平板上都长出了多到无法计数的菌落（见下表1）。在第二次实验中，自己制备感受态细胞，但这一次，所有的平板上都没菌落生长（见下表1）。接着又进行了第三次实验，这次得到了转化子（见下表1）。从实验平板上挑出12个菌落，分离质粒DNA，并用BamHI进行切割，其中9个克隆产生大小同载体pUC18一样的单一的一条带，另3个克隆中切出一个pdc基因，实验终于获得成功。 第三次实验如何进行转化子的挑选？并说明其原理？

打算将一个 cDNA 克隆到一个表达载体，以便在 E．coli 中大量制备相应的蛋白质。这个cDNA 的两侧具有 BamHI的位点，因此计划将它从 BamHI的位点插入载体中。实验严格地按照克隆手册中的方法进行：载体用 BamHI切割以后，立即用碱性磷酸酶处理除去 5’磷酸；接着将处理过的载体同用 BamHI切割的 cDNA 片段混合，加入 DNA连接酶后进行温育，连接之后，将 DNA 同已处理过的可以接受 DNA的细菌感受态细胞混合。最后，将混合物涂布在加有抗生素固体培养基的平板上。由于载体上带有抗生素的抗性基因，所以，转化的细菌能够存活。实验中同时设置了 4 个对照：  对照1：   将未同任何载体接触过的细菌细胞涂布在培养平板上；        对照2：   将未切割载体转化过的细菌细胞涂布在培养平板上；   对照3：   将经切割（但未用碱性磷酸酶处理）并用连接酶连接（但没有cDNA片段）的载体转化过的细菌细胞涂布在培养平板上；   对照4：   将经切割（并用碱性磷酸酶处理过）并用 DNA连接酶连接（但没有cDNA片段）的载体转化过的细 菌细胞涂布在培养平板上。        在进行第一次实验时，感受态细胞不是自己制备的，结果，在所有的平板上都长出了多到无法计数的菌落（表 2）。在第二次实验中，自己制备感受态细胞，但这一次，所有的平板上都没有菌落生长（表 2）。接着又进行了第三次实验，这次得到了转化子（表 2）。从实验平板上挑出 12 个菌落，分离了质粒 DNA，并用 BamHI进行切割，其中 9个克隆产生大小同载体一样的单一的一条带，另三个克隆中切出一个cDNA 片段，实验终于获得成功。 影响第二次实验结果的原因是什么？对照2 的作用何在？

原核生物主要有两种类型的 DNA连接酶：E．coliDNA连接酶和 T4DNA 连接酶。基因工程中使用的主要是 T4DNA连接酶，它是从 T4 噬菌体感染的 E．coli 中分离的种单链多肽酶，分子量为——』Oa，由 T4 噬菌体基因——编码。E．coli DNA连接是由大肠杆菌基因一编码，也是一条多肽链的单体，分子量为（）kDa。这两DNA 连接酶有两个重要的差异：第一是它们在催化反应中所用的能量来源不同，TDNA连接酶用（），而 E．coli DNA连接酶则用（）作为能源。第是它们催化平末端连接的能力不同，在正常情况下只有T4DNA连接酶能够连接平末端E．coliDNA连接酶则不能。即使是调整反应条件，E．coli DNA连接酶催化平末端连接效率也只有 T4 DNA连接酶的（）。