影响抗原抗体反应的因素有：反应物自身因素和环境因素。不同来源的抗体，反应性各有差异，抗体的浓度、特异性和亲和力都影响抗原抗体反应，抗原的理化性状、分子量、抗原决定簇的种类及数目影响反应结果。环境因素包括电解质、酸碱度和温度。为了促成沉淀物或凝集物的形成，常用0.85%NaCl或各种缓冲液作为抗原及抗体的稀释液。抗原抗体反应一般在pH6～9之间进行，有补体参与的反应pH为7.2～7.4，pH过高或过低都会影响抗原与抗体反应。在一定范围内，温度升高可加速分子运动，抗原与抗体碰撞机会增多，使反应加速。一般为15～40℃，常用的抗原抗体反应温度为37℃，温度如高于56℃可导致已结合的抗原抗体再解离，甚至变性或破坏。每种实验都有其独特的最适反应温度要求。