(1)二甲苯的作用：由于二甲苯能溶解石蜡，故石蜡切片在HE染色前必须先经过二甲苯处理，以脱去组织中的石蜡使染料与组织中各种成分结合。染色后二甲苯起透明切片的作用。
(2)酒精的作用：因为酒精既可溶解于二甲苯又溶解于水，组织脱蜡后经由高到低的梯度浓度酒精处理后可进行水洗并与水溶性的染色剂结合。染色后组织又经过从低到高的梯度浓度酒精处理是为了除去组织中残留的水分，为二甲苯透明组织创造条件，使组织切片的透明度达到光镜观察时的要求。
(3)水洗的作用：组织经水洗可直接与水溶性染色剂结合，另一方面洗去未与组织结合的染色液以及终止分化。