试述免疫固定电泳的原理,如何鉴定M蛋白?
免疫固定电泳是将区带电泳和沉淀反应相结合的免疫化学分析技术。先对蛋白质混合样品做区带电泳,将蛋白质分离成不同区带,然后把抗血清直接加于蛋白质区带表面或将浸有抗血清的滤纸贴于其上,抗原与相应抗体发生沉淀反应,形成的免疫复合物嵌于固相支持物中,洗去游离的抗原或抗体,则出现被结合固定的某种蛋白质。本法可用于各种蛋白质的鉴定,最常用于M蛋白的鉴定。免疫固定电泳鉴定M蛋白的方法是:①血清或血浆在醋酸纤维薄膜或琼脂糖凝胶上做区带电泳(6孔);②将有6条空隙的塑料膜覆盖在蛋白质表面;③向每空隙内加入一种抗体,由上而下依次加入抗正常人全血清、抗IgG、抗IgA、抗IgM、抗κ轻链和抗入轻链抗体;④反应30min后,洗去游离蛋白,待干燥后染色;⑤结果判断,M蛋白形成窄而致密的沉淀带,正常免疫球蛋白形成均质状宽带。
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