（一）准备工作
1.用物准备清洁盘、腰椎穿刺包、无菌试管若干、乙醇灯、火柴，注射用药（按需准备）。
2.患者准备嘱患者侧卧于硬板床上，背部与床边垂直，头前屈，双手抱膝紧贴腹部，使躯干呈弓形；或由助手用一手帮助挽头，另一手挽双下肢腘窝处，并用力抱紧，使脊柱尽量后凸，增宽椎间隙，以利进针。
3.医师准备熟记操作方法，戴好口罩及帽子。
（二）操作方法
1.常选用两髂后上棘连线与后正中线交会处（相当于第3～4腰椎棘突间隙）作为穿刺点，也可在上一或下一个腰椎棘突间隙进行。
2.常规消毒皮肤，带无菌手套，覆盖消毒洞巾，局部麻醉，达椎间韧带。
3.穿刺：用左手拇指及示指固定穿刺点皮肤，右手持穿刺针，从棘间隙与脊柱呈垂直方向，针头斜面向上缓慢进针。成人进针深度4～6cm，儿童2～4cm。如触及骨质，将针头后退少许，并稍偏向头部方向摧进。穿过黄韧带及硬脊膜时有突然落空感，此时缓慢拔出针芯即有脑脊液流出。
4.立即快速接上测压管测压。可见脑脊液在测压管内上升到一定水平后液面随呼吸轻微波动，记录此时的压力值，即为初压。正常脑脊液压力为70～180mmHO或40～50滴／min。
若做Queckenstedt试验，了解蛛网膜下隙有无阻塞，在测初压后，由助手先压迫一侧颈静脉约10s，再压另一侧，最后同时按压双侧颈静脉。正常时压迫颈静脉后，脑脊液压力立即迅速升高1倍左右，解除压迫后10～20s，迅速降至原来水平，称梗阻试验阴性，示蛛网膜下隙通畅。若压迫颈静脉后脑脊液压力不升高，为梗阻试验阳性，示蛛网膜下隙完全阻塞。若压迫后压力缓慢上升，松开后又缓慢下降，示不完全阻塞。颅内压增高者禁做此试验。
5.移去测压管，收集脑脊液2～5ml，送常规、生化、免疫学检验，必要时送细菌培养及细胞学检查。
6.收集脑脊液完毕，插入针芯后一起拔出穿刺针，针孔处消毒后，盖上无菌纱布并用胶布固定。
7.术后患者去枕平卧或俯卧4～6h，以免引起术后低颅压头痛。
（三）注意事项
1.疑有颅内压增高者除急性脑膜炎或蛛网膜下腔出血外，宜在腰穿前做必要检查，如颅脑CT、MRI。
2.患者如不安、躁动和不能合作可在镇静药或麻醉下进行穿刺。
3.穿刺中应注意观察患者神志、脉搏、呼吸、面色等，如有异常，应立即停止操作，予以处理。如有瞳孔散大、呼吸节律改变、意识不清等脑疝症状，立即停止放液，并做相应处理。
4.无菌操作及消毒应严格，以免造成人为颅腔及脊髓腔内感染。
5.腰椎穿刺后，尤对颅内压增高者，术后12～24h，应注意其神志、脉搏、呼吸、血压及瞳孔等变化。
6.椎管内注药时先放液，再注药，应注意药物剂量及浓度，并不断用脑脊液稀释，等量交换，速度宜慢，以减少颅压波动及药物刺激。
（四）质量要求
1.患者体位正确。
2.穿刺部位选择正确。
3.消毒、铺巾、无菌操作、局部麻醉操作正确、规范。
4.穿刺操作正确、规范。
5.术毕处理及指导患者术后体位正确。
6.熟悉腰椎穿刺术注意事项。