梅毒的实验室检查有梅毒螺旋体检查和梅毒血清反应检查。临床常用的螺旋体检查法为暗视野映光法，梅毒螺旋体的螺旋紧密规则，折光强，运动活泼，易于辨认。发现梅毒螺旋体对一期梅毒诊断很有帮助，特别是已出现下疳而血清梅毒反应未转为阳性前更有诊断意义。
梅毒血清试验方法很多，所用抗原有非螺旋体抗原和梅毒螺旋体抗原两类。以梅毒螺旋体作抗原的试验，国际上常用的有荧光螺旋体抗体吸收试验（FTA—ABS）、苍白螺旋体血凝试验（TPHA）等，其特异性强，敏感度高。梅毒血清试验对各期梅毒的诊断都很重要，早期梅毒常有强阳性反应。