使用溴化乙啶染色，DNA片段聚集的地方，在紫外光下可以显示发橙色荧光的条带，结合使用多种限制性内切酶，通过综合分析将这些片段，作出DNA限制性内切酶酶切图谱，又称为（）。

现在医学科学工作者通过获得大量特异DNA片段，结合适当的分析技术，可以鉴定基因缺陷。当前临床或研究室获得大量特异DNA片段最流行的方法是（）

限制性核酸内切酶，简称限制酶，是一类能识别双链DNA分子中特定的核苷酸序列，并在识别序列内或附近切割DNA双链结构的核酸酶。限制性核酸内切酶切割DNA后不会产生（）

限制性核酸内切酶，简称限制酶，是一类能识别双链DNA分子中特定的核苷酸序列，并在识别序列内或附近切割DNA双链结构的核酸酶。限制性核酸内切酶可分为多种类型，其中应用最广的是（）

常用的DNA聚合酶主要有大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ、TaqDNA聚合酶、大肠杆菌DNA聚合酶ⅠKlenow片段、T4DNA聚合酶、T7DNA聚合酶、反转录酶等。所有的DNA聚合酶都具有（）

限制酶反应结果若显示没有切割，可能原因是（）

用同一种限制酶切割载体和目的基因后进行连接，连接产物会含大量自身环化载体，采用下列哪种酶处理，可防止载体自身环化（）

同尾酶切割DNA产生的末端是相同的，且是对称的。

在基因工程中可通过哪3种途径获得目的基因的DNA片段？

Southern印迹是只能用DNA探针检测DNA片段。

打算将一个 cDNA 克隆到一个表达载体，以便在 E．coli 中大量制备相应的蛋白质。这个cDNA 的两侧具有 BamHI的位点，因此计划将它从 BamHI的位点插入载体中。实验严格地按照克隆手册中的方法进行：载体用 BamHI切割以后，立即用碱性磷酸酶处理除去 5’磷酸；接着将处理过的载体同用 BamHI切割的 cDNA 片段混合，加入 DNA连接酶后进行温育，连接之后，将 DNA 同已处理过的可以接受 DNA的细菌感受态细胞混合。最后，将混合物涂布在加有抗生素固体培养基的平板上。由于载体上带有抗生素的抗性基因，所以，转化的细菌能够存活。实验中同时设置了 4 个对照： 对照1： 将未同任何载体接触过的细菌细胞涂布在培养平板上； 对照2： 将未切割载体转化过的细菌细胞涂布在培养平板上； 对照3： 将经切割（但未用碱性磷酸酶处理）并用连接酶连接（但没有cDNA片段）的载体转化过的细菌细胞涂布在培养平板上； 对照4： 将经切割（并用碱性磷酸酶处理过）并用 DNA连接酶连接（但没有cDNA片段）的载体转化过的细 菌细胞涂布在培养平板上。 在进行第一次实验时，感受态细胞不是自己制备的，结果，在所有的平板上都长出了多到无法计数的菌落（表 2）。在第二次实验中，自己制备感受态细胞，但这一次，所有的平板上都没有菌落生长（表 2）。接着又进行了第三次实验，这次得到了转化子（表 2）。从实验平板上挑出 12 个菌落，分离了质粒 DNA，并用 BamHI进行切割，其中 9个克隆产生大小同载体一样的单一的一条带，另三个克隆中切出一个cDNA 片段，实验终于获得成功。 你如何看待第一次的实验结果？对照 1 的目的是什么？

原核生物主要有两种类型的 DNA连接酶：E．coliDNA连接酶和 T4DNA 连接酶。基因工程中使用的主要是 T4DNA连接酶，它是从 T4 噬菌体感染的 E．coli 中分离的种单链多肽酶，分子量为——』Oa，由 T4 噬菌体基因——编码。E．coli DNA连接是由大肠杆菌基因一编码，也是一条多肽链的单体，分子量为（）kDa。这两DNA 连接酶有两个重要的差异：第一是它们在催化反应中所用的能量来源不同，TDNA连接酶用（），而 E．coli DNA连接酶则用（）作为能源。第是它们催化平末端连接的能力不同，在正常情况下只有T4DNA连接酶能够连接平末端E．coliDNA连接酶则不能。即使是调整反应条件，E．coli DNA连接酶催化平末端连接效率也只有 T4 DNA连接酶的（）。