1.操作前准备（1）物品准备：腰椎穿刺包一个。（2）操作者自身准备：戴口罩、帽子（鼻孔、头发不外露），洗手。（3）患者准备：患者取侧卧位，背部与床面垂直，头向前胸屈曲，两手抱膝紧贴于腹部。
2.操作步骤（1）穿刺点的选择：选择一个常用的穿刺点，并在体表定位（第3～4腰椎棘突间隙即髂后上棘与后正中线的交汇处，有时上移或下移一个腰椎间隙）。（2）以穿刺点为中心消毒皮肤2～3遍。（3）戴无菌手套，铺洞巾，用2%利多卡因自皮肤至椎间韧带做局部浸润麻醉。（4）穿刺①检查者左手固定穿刺部位皮肤，右手持穿刺针以垂直背部或针尖稍斜向头部的方向缓慢刺入。②当感到穿刺阻力突然消失（即针头穿过韧带与硬脊膜），此时将针芯慢慢抽出，见脑脊液流出。③测压与放液：接测压管测量压力并记录。撤去压力管，用试管收集适量脑脊液送检。④收集脑脊液后将针芯插入，缓慢拔出穿刺针，穿刺点消毒，覆盖无菌纱布，按压穿刺点，用胶布固定。⑤操作结束后嘱患者去枕平卧4~6小时。