图示λZAP载体的组成结构及优点及其内删除源理。
组成结构:①含有具内删除特性的pBbluescriptSK噬菌粒;
②在pBbluescriptSK噬菌粒两端具有f1的起始子(I)和终止子(T);
③在pBbluescriptSK噬菌粒内部具有多克隆位点MCS;
④在多克隆位点的两端带有T3和T7启动子;
⑤在该载体的两端具有cos末端。
优点:
①可克隆10kb大小的外源DNA;
②当外源DNA插入取向和读码结构正确,就能表达出融合蛋白质,并可用抗体筛选;
③当外源DNA插入在多克隆位点,使β-半乳糖苷酶失活,故可用X-gal显色的组织化学筛选重组子(白色为重组子);
④克隆的外源DNA可在体内随pBbluescriptSK噬菌粒删除下来,省去了常规的亚克隆;
⑤利用T3或T7噬菌体的RNA聚合酶,可方便地制备外源插入的DNA的任何一条链的mRNA;
⑥可定向克隆。
内删除原理:当含有外源DNA插入的重组λZAP载体,感染大肠杆菌F+菌株,在用辅助噬菌体M13(或f1)超感染。于是,在细胞内由此辅助噬菌体基因Ⅱ反式作用蛋白质,便会识别位于λZAP载体上的f1起始子和终止子,并最终导致含有外源DNA插入的pBbluescriptSK噬菌粒在体内从λZAP载体上删除下来,最终被辅助噬菌体M13的蛋白质包装成单链DNA噬菌体颗粒,并被挤出寄主细胞。
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