1.酶结构的改变：固定化导致酶的活性中心或调节中心的构象发生变化。
2.微环境的改变：微环境是指在固定化酶附近的局部环境，而把主体溶液称为宏观环境。
3.位阻效应：指载体的遮蔽作用。
4.分配效应：由于载体的亲水和疏水性质使酶的底物、产物或其它效应物在载体和溶液间发生不等分配，改变酶反应系统的组成平衡，从而影响酶反应速度：A.如果载体与底物带相同电荷，则酶的Km值将因固定化而增大；如果带相反电荷，则Km值减小；B.当载体带正电荷时，酶活性-pH曲线向酸性方向偏移；当载体带负电荷时，酶活性-pH曲线向碱性方向偏移；C.如载体是疏水性，底物为极性物质或电荷物质，则酶的Km值将因固定化而降低。
5.扩散限制效应：是指底物或其它效应物的迁移和运转受到限制。
（1）外扩散限制：指底物或其它效应物从溶液穿过包围在固定化酶周围近于停滞的液膜层到固定化酶表面所受到的限制。可通过充分搅拌或混合予以减轻或消除。
（2）内扩散限制：指底物或其它效应物从固定化酶颗粒表面进入颗粒内部酶活性位点的限制。