（1）牛脑CaM的分离提取
在4℃条件下，取新鲜牛脑100g，除去脂肪及结缔组织等，用手术剪剪碎后，加入预冷的CaM的提纯缓冲液250mL，在预冷高速组织匀浆机中进行匀浆，所得匀浆液在4℃，15000g离心40min，收集上清液。沉淀物再用上述方法重新提取一次，合并两次上清液。将收集的上清液分批置于沸水浴中加入4min后，取出置于冰盐浴中迅速冷却。静置一段时间后再4℃、15000g离心30min，收集上清液备用。即可得到牛脑中的CaM。
（2）牛脑CaM的纯化制备
Phenyl-Sepharose层析柱先用缓冲液A冲洗平衡，调节蠕动泵、部分收集器、记录仪的转速。将上清液用CaC₂l调Ca²⁺浓度约为2mmol/L上phenyl-Sepharose柱层析。上样完毕后用缓冲液A冲洗层析柱，至峰值达到基线。换用缓冲液B冲洗层析柱，至峰值达到基线。再用缓冲液C冲洗层析柱，在280nm检测出吸收峰开始收集此组织洗脱液，直至峰值达到基线。最后用大量去离子水冲洗层析柱，再重复上述步骤进入下一个循环。
将上述收集的洗脱液与（NH₄）₂₃缓冲液透析24h，开始每2h换一次透析缓冲液，此后更换间隔可延长。24h后将袋中透析液于冷冻干燥机中冷冻干燥成粉末状，-20℃分装保存备用。
（3）活性鉴定
根据CaM对环核苷酸磷酸二酯酶活性对激活作用，故用PDE法鉴定牛脑CaM的活性。