正确答案
利用酶等蛋白质在有机溶剂中的溶解度不同而使之分离的方法。1).沉淀机理:降低溶液的介电常数;引起蛋白质脱水2).常用有机溶剂:丙酮乙醇甲醇,用量一般为酶液体积的2倍左右,终浓度为70%。3).优缺点:优点:①分辨率比盐析法高②沉淀不需脱盐③溶剂易蒸发,沉淀易离心。缺点:①容易引起蛋白质变性失活②有机溶剂易燃、易爆,对安全要求较高。4).影响有机溶剂沉淀的因素①温度:低温(0℃)操作。②pH值:尽可能靠近其等电点。③离子强度:采用<0.05mol/L的稀盐溶液,增加蛋白质在有机溶剂中的溶解度,目的:防止蛋白质变性④蛋白质浓度:适当,一般为5〜20mg/ml
试题解析