常用的蛋白质沉淀方法有哪些?有机溶剂沉淀蛋白质的机理什么?用乙醇沉淀蛋白质时应注意哪些事项?
①常用的蛋白质沉淀方法有:
蛋白质盐析沉淀、蛋白质等电点沉淀、有机溶剂沉淀法及运用沉淀动力学沉淀法等。
②有机溶剂沉淀蛋白质的机理是:
向蛋白质溶液中加入有机溶剂,水的活度降低。随着有机溶剂溶度的增大,水对蛋白质分子表面荷电基团的水化程度降低,液体的介电常数下降,蛋白质分子间的静电引力增大,从而凝聚和沉淀。
③用乙醇沉淀蛋白质时应注意的事项:
1、低温条件下操作可以提高收率和减少蛋白质失活变性(加入有机溶剂为放热反应);
2、采用的有机溶剂必须与水互溶,与蛋白质不发生作用;
3、蛋白质分子量越大,需要加入的溶剂量越少;
4、一种蛋白质的溶解度常会因为另一种蛋白质存在而降低;
5、沉淀的蛋白如果不能再被溶解,可能已经变性;
6、很多酶和蛋白质在20-50%(V/V)就能产生沉淀;当溶剂量达到50%时,通常只有分子量≤1500的蛋白留在溶液中;
7、PH=PI时,需要加入的溶剂量减少;
8、盐析法沉淀的蛋白质采用有机溶剂精制时必须与先进行透析。
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