以检测HIV为例说明Western印迹.
免疫印迹法又称印迹法。它将凝胶电泳与固相免疫结合,把电泳分区的蛋白质转移至固相载体,再用酶免疫、放射免疫等技术测定。该法能分离分子大小不同的蛋白质并确定其分子量,常用于检测多种病毒的抗体或抗原。例如,该法检测血清HIV抗体为HIV感染的确诊实验之一。第一步将HIV用离子去污剂十二烷基硫酸钠(SDS)裂解病毒结构蛋白,然后用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE将分子大小不同的蛋白质分开,这一方法简称SDS-PAGE。第二步,将电泳分离的病毒蛋白质转印到硝酸纤维素膜上(电转印法)。第三步,将硝酸纤维素膜浸于待检血清中,若血清含HIV抗体,即与膜上的相应病毒蛋白抗原结合,洗涤去除未结合的抗体,再加酶标记的二抗,最后加底物显色。
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